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噬菌体侵染细菌的实验——Blendor实验  

2009-11-13 13:37:12|  分类: 资料收藏 |  标签: |举报 |字号 订阅

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摘自《分子生物学》,一江秋水提供,有助于全面准确地理解实验结果
三、Blendor实验
  关于DNA的遗传特性最有力的证据来源于大肠杆菌噬菌体T2的实验。由于用了厨房里的搅拌器(Blendor)作为装置的一个主要部件,所以叫做Blendor实验。Alfred Hershey和Martha Chase证实噬菌体粒子注入到细菌中的DNA含有全部合成子代噬菌体所需要的遗传信息。
组成一个单个噬菌体的DNA被包装在蛋白质外壳内,在噬菌体粒子中只有DNA是含磷的物质,蛋白质外壳所含氨基酸中仅仅是甲硫氨酸和胱氨酸含硫原子。在32P标记的培养基中培养则能得到磷标记了DNA的噬菌体。如果在35S标记的培养基中培养则能得到35S标记了蛋白质外壳的噬菌体。用这两种不同标记的噬菌体分别去感染细菌就可以根据其放射活性将噬菌体的DNA 和蛋白质在被感染的细胞上定位。Alfred Hershey和martha Chase证明了这些噬菌体注入细菌细胞内的是32P标记物而不是35S标记物。
第一个实验是把35S标记的噬菌体与细菌混合,吸附几分钟后,离心除去没有吸附上的噬菌体,收集沉淀(噬菌体—细菌混合物),将沉淀悬浮后再一次离心,收集上清液和沉淀,分别测定放射性活性,发现80%的放射活性存在于上清液中,沉淀中只有20%的放射活性,这是由于在这期间大部分吸附的噬菌体已经将其DNA注入细菌而蛋白质外壳与细菌解离进入上清液,但仍然有少部分留在细菌细胞壁上,后来证明沉淀中的20%放射活性确实是由于尾丝与细菌表面结合太紧,以至于Blendor也不容易把它除去。32P标记的噬菌体和细菌混合,用上述方法同样处理后实验结果差别很大,70%的放射活性在沉淀里,而30%的放射活性在上清液里。在上清液的30%的放射活性可能是由于搅拌细菌时破裂产生的。(几年后发现有些缺损噬菌体粒子不能将其DNA注入到细菌中去)。把这些沉淀悬浮在生长培养基中重新保温,发现能够产生子代噬菌体的细菌同时也具有从亲代噬菌体转移32P到细菌细胞中去的能力。
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